科研實驗常用人肝癌細(xì)胞株的區(qū)別

肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年來發(fā)病率急劇上升的惡性腫瘤之一。肝癌細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于各類肝癌的研究。肝癌細(xì)胞系的基因組與健康人細(xì)胞系的基因組不同。常見的人肝癌細(xì)胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一種細(xì)胞系都有自己的特點，但是，SMMC-7721,、MHCC9-L已經(jīng)退出實驗舞臺，由于它們具有與原代肝癌細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，無生物學(xué)改變、特性穩(wěn)定、無限制...

查看更多

慢病毒包裝常見問題匯總

Q:什么是MOI？A:在微生物學(xué)中，MOI是病原體(如噬菌體或病毒、細(xì)菌等)與感染目標(biāo)(如細(xì)胞)的比率。對于病毒，MOI是病毒顆粒數(shù)量與特定空間中存在的目標(biāo)細(xì)胞數(shù)量的比率。通?？蓪⒛持昙?xì)胞有80%被感染時所用的病毒顆粒數(shù)和細(xì)胞數(shù)目的比值作為該株細(xì)胞的MOI。Q：如何稀釋病毒？A：您可使用完培、PBS液等將病毒稀釋到需要的滴度。如將滴度為5x109TU/ml的病毒稀釋到1x109TU/ml，則需取20µl病毒液加入到80µl的完培中。Q：用于病毒感染的細(xì)...

查看更多

慢病毒包裝步驟

1.重組慢病毒的制備Day1:匯合度90%的10cmdishsHEK293T細(xì)胞（~6×107/dish）按1：1比例傳代至15cmdishs，第二天細(xì)胞匯合度達到90%-95%（~1.5×108/dish），培養(yǎng)基為Gibico高糖DMEM培養(yǎng)基（含10%FBS）。Day2:轉(zhuǎn)染前2-3個小時更換培養(yǎng)基（含10%FBS)；2)按照以下比例配制轉(zhuǎn)染試劑：Mix1體積μlMix2量DMEM（無FBS）1000μlDMEM（無FBS）1000μl目的基因質(zhì)粒25μgVGF190μ...

查看更多

病毒實驗原理和慢病毒包裝系統(tǒng)介紹

慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒實驗原理慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組為雙鏈RNA。但區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒具有更廣的宿主范圍，對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。重組慢病毒載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的工具載體，...

查看更多

攪拌罐生物反應(yīng)器培養(yǎng)貼壁細(xì)胞如何選擇微載體

微載體能夠在攪拌罐生物反應(yīng)器中培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。然而，不存在用于微載體選擇的穩(wěn)健、可轉(zhuǎn)移的方法，研究提供很少或沒有解釋為什么使用微載體的原因。我們系統(tǒng)地評估了來自三個供體的用于人骨髓來源的MSC(hBM-MSCs)擴增的13種微載體，以建立一種可重現(xiàn)和可轉(zhuǎn)移的微載體選擇方法。單層研究證明了輸入細(xì)胞系在生長動力學(xué)和代謝物通量方面的變異性。與hBM-MSC2和hBM-MSC3相比，HBM-MSC1在三個傳代中經(jīng)歷了更多的累積群體倍增。在100mL轉(zhuǎn)瓶中，攪拌條件明顯優(yōu)于靜態(tài)條件，與供...

查看更多