使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術使用傳統(tǒng)體外方法生產的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時間的方式同時培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續(xù)生產大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細胞培養(yǎng)常見問題匯總

細胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數和洗脫樣品CV數，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設備供應商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當層析柱直...

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熒光定量PCR實驗中PCR儀器選購技巧

聚合酶鏈反應(PCR)技術是無數研究和測試實驗室的主要技術，涉及的領域包括生物醫(yī)學、基因編輯、食品微生物學測試等。熒光定量PCR技術使用熱循環(huán)來促進一系列反應，在這些反應中，DNA樣本會快速、呈指數地復制，從而產生數百萬或數十億個序列拷貝。購買PCR儀器時，重要的是要考慮您的應用的最終目標、熱循環(huán)設備的準確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統(tǒng)都使用聚合酶鏈式反應復...

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應用差速離心法分離外泌體的原理

外泌體是一種小的(40-100nm)細胞外膜囊泡，目前進行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應用差速離心法和粒徑分析等是細胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機制各不相同具體取決于細胞的類型和當前狀態(tài)。通常可以辨別出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細胞的細胞質和質膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時...

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