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微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂,對微生物控制的發(fā)酵過程進行優(yōu)化,我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長反應特性。微生物細胞生長是細胞個體內(nèi)許多化學反應的綜合結果。這些反應包括合成提供其它反應需要的吉布斯自由能;利用底物合成結構單元,再聚合成大分子物質(zhì),供合成細胞所需等。正常情況下,微生物細胞為了確保有序和高效生長,必須將這些反應有機地結合在一起,經(jīng)濟地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長過程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長期間,生物合...
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[實驗原理]當細胞置于非常高的電場中,細胞膜就變得具有通透性,能讓外界的分子擴散進細胞內(nèi),這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運用這一技術,許多物質(zhì),包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉導方法,電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型,包括細菌、酵母、植物和動物細胞;而且,它還能作為注射方法(稱為電注射),把各種外源物質(zhì)引入活細胞。與其他常用的導入外源物質(zhì)的方法相比,電穿孔具有很多優(yōu)點。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針,不需要技術培訓和昂貴的設備,可以一次對成百萬...
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內(nèi)毒素去除方法概述內(nèi)毒素是存在于革蘭氏陰性細菌外膜中的致病因子,具有較好的耐熱性和穩(wěn)定性,對人體健康有著不可忽視的危害。本文將概述內(nèi)毒素的成分和特性,并討論了目前常見的內(nèi)毒素去除方法包括超濾去除法、活性炭法、表面活性劑萃取、強酸強堿、層析法等。同時還分析了各種方法的優(yōu)缺點以及在工業(yè)生產(chǎn)中的應用前景。一、超濾去除法和活性炭法內(nèi)毒素由多糖O抗原、核心多糖和類脂A等組成,作為細菌外膜的主要結構成分,不易被化學藥品破壞。為了有效去除內(nèi)毒素,可以采用多種方法。超濾去除法通過使用孔徑適當...
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【實驗原理】磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣-DNA復合物的一種將DNA導入真核細胞的轉染方法。磷酸鈣有利于促進外源DNA與靶細胞表面的結合。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲作用進入靶細胞,被轉染的DNA可以在細胞內(nèi)進行瞬時表達,也可整合到靶細胞的染色體上從而產(chǎn)生不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。該方法可廣泛用于轉染許多不同類型的細胞。細胞轉染試劑【儀器、材料和試劑】(一)儀器、用具CO2培養(yǎng)箱[1]、10cm細胞培養(yǎng)平板、巴斯德吸管、微量移液器[2]、15ml錐形管、燒杯、量筒...
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CRISPR/Cas(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats/CRISPR-associatedprotein)系統(tǒng)是當前先進的基因編輯技術之一。該技術因其高效、精確和相對容易操作的特點,在生物醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、生物技術等領域獲得了廣泛的應用。CRISPR/Cas系統(tǒng)主要包含兩個部分:一個能夠識別目標DNA序列的導向RNA(gRNA)和一個能夠切割DNA的Cas蛋白。通過設計特定的gRNA來引導Cas蛋白到特定的DN...
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