研究生實驗-大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化一、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗，掌握大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化的方法和技術(shù)。獲得感受態(tài)細胞；制備含有目的片段的陽性克隆。二、實驗原理轉(zhuǎn)化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實驗技術(shù)。轉(zhuǎn)化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ，Mˉ)，它可以容忍外源DNA分子進入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。...

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分子生物學實驗-DNA重組技術(shù)

DNA重組技術(shù)（連接）一、實驗?zāi)康捏w外連接獲得重組分子，用于轉(zhuǎn)化受體細胞。二、實驗原理DNA重組技術(shù)是用內(nèi)切酶分別將載體和外源DNA切開，經(jīng)分離純化后，用連接酶將其連接，構(gòu)成新的DNA分子。外源DNA片段和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)策略有以下幾種：1、帶有非互補突出端的片段用兩種不同的限制性內(nèi)切酶進行消化可以產(chǎn)生帶有非互補的粘性末端，這也是最容易克隆的DNA片段，一般情況下，常用質(zhì)粒載體均帶有多個不同限制酶的識別序列組成的多克隆位點，因而幾乎總能找到與外源DNA片段末端匹配的限制酶切...

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分子生物學實驗-載體和目的片段的酶切

實驗三、載體和目的片段的酶切A載體和外源DNA的酶切一、實驗?zāi)康膶W習和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。絕大多數(shù)限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的...

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RAW264.7細胞系在破骨細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

破骨細胞是骨吸收的主要功能細胞，在骨發(fā)育、生長、修復(fù)、重建中起著重要的作用。由于破骨細胞在體內(nèi)數(shù)量較少且分離困難，目前常用的誘導(dǎo)法之一是利用RAW264.7細胞系進行破骨細胞培養(yǎng)。本文重點介紹了RAW264.7細胞系誘導(dǎo)法，以及調(diào)節(jié)信號通路中起關(guān)鍵作用的細胞因子。破骨細胞是調(diào)節(jié)骨組織代謝的重要細胞類型，在骨發(fā)育、生長、修復(fù)和重建中起著至關(guān)重要的作用。然而，由于破骨細胞在體內(nèi)數(shù)量少且分離困難，研究者需要尋找合適的方法來進行破骨細胞的培養(yǎng)。近年來，利用RAW264.7細胞系進行破...

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質(zhì)?；蚪M提取實驗步驟

DNA提取是生物學實驗中常見的實驗步驟，用于分離和純化DNA以進行后續(xù)實驗分析。本文將介紹使用天根質(zhì)粒DNA提取試劑盒進行質(zhì)?；蛱崛〉膶嶒灢襟E。該試劑盒使用堿裂解法提取質(zhì)粒DNA，具有簡便快速、高效純化的特點。實驗步驟如下：一、培養(yǎng)細菌并制備含有質(zhì)粒的細胞懸液：1.從平板上挑取單克隆細菌，轉(zhuǎn)入含有3mLLB+Amp100培養(yǎng)基的試管中。使用含有抗生素氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基可以選擇性地培養(yǎng)含有質(zhì)粒的細菌群體。2.在37℃的恒溫搖床上振蕩培養(yǎng)過夜，以促進細菌生長并擴增質(zhì)粒。二、...

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