發(fā)酵工程培養(yǎng)基有哪些

發(fā)酵工程培養(yǎng)基主要使用發(fā)酵培養(yǎng)基：發(fā)酵培養(yǎng)基是指為了在生產(chǎn)中更加利于菌種代謝產(chǎn)物的生成而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，這類培養(yǎng)基常見的主要有以下幾種：SOB（SuperOptimalBroth）培養(yǎng)基：是一種富營養(yǎng)培養(yǎng)基，其配方為：2%胰蛋白胨,0.5%酵母提取物,10mMNaCl,2.5mMKCl,10mMMgCl2,10mMMgSO4。與LB培養(yǎng)基相比，SOB培養(yǎng)基中含有兩倍多的蛋白胨，富含更多的氨基酸及多肽。此外，SOB培養(yǎng)基中含有鎂離子，鎂離子是高密度培養(yǎng)必須的離子。利用SOB培養(yǎng)基...

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流式細(xì)胞技術(shù)介紹

流式細(xì)胞技術(shù)是一項(xiàng)廣為使用、基于激光的生物學(xué)技術(shù)，利用流式細(xì)胞儀對處于快速流動的熒光染色的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析和分選，是當(dāng)代主要的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。主要有以下幾個特點(diǎn)：1.只要樣本制成單個細(xì)胞或生物顆粒懸液均可以分析。2.測量速度快，每秒鐘可以測量數(shù)千個乃至數(shù)萬個細(xì)胞3.同時測量每個細(xì)胞的多參數(shù)特征。4.在進(jìn)行細(xì)胞特征分析的同時可以把有特征細(xì)胞分離出來(分選技術(shù))關(guān)于流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成——1.液流系統(tǒng)，包括流動室和液流驅(qū)動系統(tǒng)；2.光學(xué)系...

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Transwell實(shí)驗(yàn)的步驟

本文主要介紹4種Transwell實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟，具體包括：Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell上皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、TranswellB16細(xì)胞的體外遷移實(shí)驗(yàn)、Transwell內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1遷移實(shí)驗(yàn)。一、Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)過程與Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。由于沒有基質(zhì)膠的阻擋，細(xì)胞穿過膜的速度較侵襲實(shí)驗(yàn)明顯加快，所以細(xì)胞量要更大。我做侵襲實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞密度是1×10°，而遷移實(shí)驗(yàn)的密度是1×10°...

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重組蛋白表達(dá)技術(shù)要點(diǎn)

大腸桿菌（E.coli）表達(dá)重組蛋白的技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展，已經(jīng)成為一個非常成熟表達(dá)系統(tǒng)。為了在大腸桿菌表達(dá)體系中獲得可溶以高表達(dá)產(chǎn)量的蛋白，一個優(yōu)秀的表達(dá)策略是重要的。為了高效表達(dá)有活性蛋白，一般需考慮以下幾個因素：1.宿主體系的選擇細(xì)菌、酵母、哺乳動物細(xì)胞、絲狀真菌和單細(xì)胞藻類均可以作為表達(dá)宿主，每一種表達(dá)宿主都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。如果需要表達(dá)的蛋白具有真核的翻譯后修飾（糖基化修飾），那么可以選擇酵母、哺乳動物細(xì)胞等，而大腸桿菌等原核表達(dá)體系則不適用。大腸桿菌作為表達(dá)外源蛋白廣...

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凝膠電泳的染色方法

凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個事實(shí)，即帶電分子將在施加電場時通過基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過，同時減緩較大蛋白質(zhì)的...

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